難辨梭菌毒素 A/B 檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫熒光法）說(shuō)明書(shū)

【產(chǎn)品名稱(chēng)】 通用名稱(chēng)：難辨梭菌毒素 A/B 檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫熒光法） 英文名稱(chēng)：VIDAS C. difficile Toxin A&B

【包裝規(guī)格】 60 測(cè)試/盒

【預(yù)期用途】 本產(chǎn)品用于檢測(cè)人糞便樣本中的難辨梭菌毒素 A 和毒素 B。 采用兩步酶免夾心法與終點(diǎn)熒光檢測(cè)相結(jié)合技術(shù)（ELFA）用于 VIDAS 系列儀器對(duì)大便 標(biāo)本中的難辨梭菌毒素 A 和毒素 B 進(jìn)行檢測(cè)。 腸道正常菌群是抑制腸道內(nèi)病原菌大量繁殖的生物學(xué)屏障。由于抗生素的大量應(yīng)用破壞 了這種屏障保護(hù)作用，導(dǎo)致內(nèi)源性或醫(yī)院獲得性病原菌如難辨梭菌的大量繁殖。 已證實(shí)難辨梭菌是抗生素相關(guān)偽膜性腸炎(PMC)的主要病原菌。偽膜性腸炎(PMC)是一 種臨床常見(jiàn)的與長(zhǎng)期大量應(yīng)用抗生素相關(guān)的綜合征。腸道的遠(yuǎn)端部位乙狀結(jié)腸和直腸病變部 位可形成偽膜性結(jié)節(jié)和斑塊（1，2，3）。若偽膜性腸炎(PMC) 得不到及時(shí)診斷和治療，將 嚴(yán)重威脅病人生命。同時(shí)難辨梭菌也是抗生素相關(guān)性結(jié)腸炎和抗生素相關(guān)性腹瀉的病原菌 （4）。 難辨梭菌引起的醫(yī)院獲得性感染在某些醫(yī)院比較嚴(yán)重，易感人群常常是那些住院人數(shù)較 多的大型醫(yī)院病人,接受的病人和長(zhǎng)期臥床病人（5，6，7）。同時(shí),嬰幼兒和囊性纖維化 (CF) 病人也是無(wú)癥狀難辨梭菌攜帶者，嬰幼兒攜帶率可達(dá) 50%（8），囊性纖維化 (CF)病人達(dá) 32% （9）。 難辨梭菌相關(guān)性疾病 (CDAD) 有很多臨床診斷指標(biāo),一般包括 : 超過(guò) 36 小時(shí)有 6 次以 上未成形大便,抗生素應(yīng)用 8 周出現(xiàn)腹瀉癥狀，無(wú)明顯誘因的腹瀉以及藥物治療中出現(xiàn)的反 應(yīng)（10）。 難辨梭菌分為產(chǎn)毒株和非產(chǎn)毒株。產(chǎn)毒株一般同時(shí)產(chǎn)腸毒素(毒素 A)和細(xì)胞毒素(毒素 難辨梭菌毒素 A/B 檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫熒光法） 版本號(hào) 11733 H-CN- 2014/01 2 B)。 但難辨梭菌某些菌株（如血清型 F）僅產(chǎn) B 毒素，不產(chǎn) A 毒素。由于通常的實(shí)驗(yàn)方法 僅檢測(cè) A 毒素，則可能出現(xiàn)漏診（2，11）。 難辨梭菌毒素 A/B 檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）用于協(xié)助診斷難辨梭菌相關(guān)性疾病 (CDAD)。該試劑可檢測(cè)大便標(biāo)本中的難辨梭菌毒素 A 和毒素 B（13）。

【檢驗(yàn)原理】 檢測(cè)采用兩步酶免夾心法與終點(diǎn)熒光檢測(cè)相結(jié)合技術(shù)（ELFA）。 固相管(SPR)具有兩種作用：固相載體和加樣。檢測(cè)試劑隨時(shí)可用且預(yù)先加在了密封的 試劑條內(nèi)。 儀器自動(dòng)完成 4 個(gè)檢測(cè)步驟。反應(yīng)液在 SPR 內(nèi)外循環(huán)數(shù)次。每步反應(yīng)后開(kāi)始清洗循環(huán) 以除去未結(jié)合成份。 l 標(biāo)本中的毒素 A 和/或 B 與 SPR 內(nèi)面包被的抗毒素 A 抗體（兔多克?。┖?B 抗體（鼠 單克?。┨禺愋越Y(jié)合。 l 毒素 A 與標(biāo)記生物素的抗毒素 A 抗體（鼠單克?。┙Y(jié)合，毒素 B 與標(biāo)記生物素的抗毒 素 B 抗體（鼠單克?。┖衔?。 l 堿性磷酸酶標(biāo)記的鏈霉親和素與生物素共同孵育以檢測(cè)生物素。 l 檢測(cè)：堿性磷酸酶將底物（4-甲基傘形酮磷酸酯）水解為可用 450nm 波長(zhǎng)檢測(cè)的熒光 產(chǎn)物（4-甲基傘形酮）。 熒光強(qiáng)度隨標(biāo)本中毒素 A 和/或 B 的含量升高而升高。 難辨梭菌毒素 A/B(CDAB)檢測(cè)試驗(yàn)完成后儀器自動(dòng)分析結(jié)果，給出試驗(yàn)值并打印每份 標(biāo)本的結(jié)果。

【主要組成成分】 試劑盒組成：60 測(cè)試 60 個(gè)試劑條 （CDAB STR） STR 即用型。 60 個(gè)固相管 （CDAB SPR） （2 x 30） SPR 即用型。難辨梭菌兔多克隆抗毒素 A 抗體和小鼠單克 隆抗毒素 B 抗體。 1 瓶標(biāo)準(zhǔn)品 （CDAB S1） （1 x 4 mL） （液體） S1 0.05mol/l TRIS 緩沖液（pH7.2）+5% BSA+防腐劑稀釋 的難辨梭菌 A 毒素 1 瓶陽(yáng)性對(duì)照品（CDAB C1） （1 x 4 mL） （液體） C1 0.05mol/l TRIS 緩沖液（pH7.2） +5%BSA +防腐劑稀 釋的難辨梭菌 A 毒素 難辨梭菌毒素 A/B 檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫熒光法） 版本號(hào) 11733 H-CN- 2014/01 3 試驗(yàn)值范圍標(biāo)在 MLE 數(shù)據(jù)上：對(duì)照品 C1（+）試驗(yàn)值范 圍 1 瓶陰性對(duì)照品（CDAB C2） （1 x 4 mL） （液體） C2 0.05mol/l TRIS 緩沖液（pH7.2） +5%BSA +防腐劑 試驗(yàn)值范圍標(biāo)在 MLE 數(shù)據(jù)上：對(duì)照品 C2（-）試驗(yàn)值范 圍 1 瓶陽(yáng)性對(duì)照品（CDAB C3） （1 x 4 mL） （液體） C3 0.05mol/l TRIS 緩沖液（pH7.2） +5%BSA +防腐劑稀 釋的難辨梭菌 B 毒素 試驗(yàn)值范圍標(biāo)在 MLE 數(shù)據(jù)上：對(duì)照品 C3（+）試驗(yàn)值范 圍 1 瓶標(biāo)本稀釋液（CDAB R1） （1 x 61mL） （液體） R1 即用型。0.05mol/l TRIS 緩沖液（pH7.2） +50%小牛 血清+去污劑+ 防腐劑 校準(zhǔn)試驗(yàn)所需的出廠主體數(shù)據(jù)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) — MLE 數(shù)據(jù)（主批次錄入）提供于試劑盒中或從  網(wǎng)站下載。 — MLE 條形碼打印于盒標(biāo)簽或從  網(wǎng)站下載。 1 份包裝說(shuō)明書(shū)在試劑盒中或從  網(wǎng)站下載。 固相管（SPR）： SPR 內(nèi)壁包被抗難辨梭菌 A 毒素和抗難辨梭菌 B 毒素抗體。SPR 可通過(guò) CDAB 標(biāo)記識(shí) 別。從鋁箔袋中取出所需數(shù)量 SPR。用后務(wù)必密封好鋁箔袋。 試劑條（STR）: 試劑條由 10 個(gè)孔組成并用鋁箔密封。鋁箔上標(biāo)有條形碼，內(nèi)容包括試劑代碼、試劑批 號(hào)、有效期等信息。第一孔未密封，用于加標(biāo)本。最后一孔為透明小管用于讀取熒光值。中 間八孔內(nèi)含各種檢測(cè)試劑。 CDAB 試劑條成份 孔 試劑 1 標(biāo)本孔 2-3-4 洗液: 0.05mol/L TRIS 緩沖液(pH 7.2)+去污劑+防腐劑(600uL) 5 標(biāo)記物:生物素標(biāo)記的鼠抗難辨梭菌 A 毒素抗體+生物素標(biāo)記的鼠抗難辨梭菌 B 毒 素抗體+防腐劑 (400µL) 6 示蹤劑 : 堿性磷酸酶標(biāo)記的鏈霉親和素+0.05 mol/L TRIS 緩沖液(pH 6.0) + 防腐 劑(400 µL) 7-8-9 洗液: 0.05 mol/L TRIS 緩沖液(pH 7.2) +去污劑+防腐劑(600 µL) 10 含底物的透明小管: 4-甲基傘形酮磷酸酯(0.6mmol/L)+二乙醇胺 DEA* (0.62mol/L 或 6.6%) pH9.2 + 1g/l 疊氮鈉 (300 µL) *刺激性試劑: - R 36:對(duì)眼睛有刺激性。 - S 26:如果接觸眼睛, 立即用大量清水沖洗并尋求醫(yī)生幫助。更多信息請(qǐng)參閱安全條例。 難辨梭菌毒素 A/B 檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫熒光法） 版本號(hào) 11733 H-CN- 2014/01 4 必需但試劑盒中未提供的材料和耗材 - 加樣槍帶一次性加樣頭，加樣量 300µL ，200µL 和 1000µL。 - 一次性無(wú)粉乳膠手套。 - 離心機(jī)，大于 12,000×g。 - 聚丙烯或其他合適的離心管，用于標(biāo)本稀釋和離心(容量至少為 1.5 mL)。 - 標(biāo)本移液管用于量取適量大便標(biāo)本。 - 涂樣棒或涂樣環(huán) - 其它特殊材料和耗材，請(qǐng)參見(jiàn)儀器用戶手冊(cè)。 - VIDAS 系列儀器

【儲(chǔ)存條件及有效期】 ? 2～8℃儲(chǔ)存，有效期 12 個(gè)月。 ? 禁止冷凍試劑。 ? 所有未用試劑存于 2～8℃。 ? 打開(kāi)試劑盒后,檢查 SPR 鋁箔袋密封是否完好且無(wú)損壞。否則,請(qǐng)勿使用 SPR。 ? 為保持 SPRs 穩(wěn)定性，取出所需 SPR 后請(qǐng)將有干燥劑的袋重新仔細(xì)密封并將整個(gè)試劑盒放 回 2～8℃。 ? 按推薦的環(huán)境儲(chǔ)藏試劑盒,可確保所有成份在標(biāo)注的效期內(nèi)穩(wěn)定。

【適用儀器】 - VIDAS 系列儀器: VIDAS mini VIDAS VIDAS 3

【樣本要求】 標(biāo)本類(lèi)型、采集與儲(chǔ)存 根據(jù)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)程序采集大便標(biāo)本并儲(chǔ)存于 2～8℃待處理。 標(biāo)本采集后應(yīng)盡快送至實(shí)驗(yàn)室。 難辨梭菌毒素 A/B 檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫熒光法） 版本號(hào) 11733 H-CN- 2014/01 5 大便標(biāo)本制備前在 2～8℃可保存最多 3 天 (自采集之日起)，不會(huì)明顯損失難辨梭菌毒素 A/B。不建議在 2～8℃保存超過(guò) 3 天。標(biāo)本在-25℃±6℃冷凍可保存 1 個(gè)月或-70℃（或更低 溫度）保存 1 個(gè)月以上。避免標(biāo)本反復(fù)凍融。由于肛拭子采集標(biāo)本量太少，不建議用此方 法。避免使用可能含去污劑、防腐劑或培養(yǎng)基的容器裝標(biāo)本。因?yàn)檫@些成份會(huì)干擾難辨梭菌 毒素 A/B 的檢測(cè)結(jié)果。 制備 CDAB 試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)、質(zhì)控和標(biāo)本 標(biāo)本 注意: 制備大便標(biāo)本前充分混勻非常關(guān)鍵?；靹虿怀浞挚蓪?dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果。為避免發(fā)生此問(wèn)題， 必須混勻大便標(biāo)本。稀釋的標(biāo)本也必須混勻，有助于保證獲得可靠結(jié)果。 液體大便： 1、 通過(guò)移液管反復(fù)抽吸使大便均一化。 用移液管將 200µL 液體大便加入一清潔離心管中； 2、 使用帶有一次性吸頭的移液器，在離心管中加入 1000µL 標(biāo)本稀釋液（R1）。 3、 通過(guò)移液管反復(fù)抽吸使大便再次均一化。 然后使用漩渦震蕩器*混勻。 確保標(biāo)本與標(biāo)本稀釋液（R1）*混勻。 4、 離心：2～25℃，最小 12,000 g，離心 5 分鐘。 5、 使用帶有一次性吸頭的移液器，取 300µL 上清用于 VIDAS 難辨梭菌毒素 AB 檢測(cè)。 注意:離心后如上清表面仍有顆粒物或脂肪，吸取上清時(shí)加樣頭應(yīng)伸入表面以下。 半固體和固體大便： 1、 為準(zhǔn)確取 200mg 半固體或固體大便，首先取 200µL 蒸餾水加入一清潔離心管。此離心 管作為“參照管"。 2、 另取一清潔離心管作為標(biāo)本管，用潔凈木棍挑取一定量大便（200mg）加入標(biāo)本管，所 取大便體積與“參照管"液面相同即可。 注意：取完固體或半固體大便標(biāo)本，可丟掉“參管"。 3、 取 1000µl 標(biāo)本稀釋液（R1）加入標(biāo)本管 4、 用漩渦震蕩器*混勻。標(biāo)本與標(biāo)本稀釋液（R1）一定要混勻。 5、離心：2～25℃，以最小 12,000 g 的速度離心 5 分鐘。 6、至少取 300µL 上清用于難辨梭菌毒素 A/B 檢測(cè)。 難辨梭菌毒素 A/B 檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫熒光法） 版本號(hào) 11733 H-CN- 2014/01 6 注意: - 離心后如上清表面仍有顆粒物或脂肪，吸取上清時(shí)加樣頭應(yīng)伸入表面以下。 - 如果半固體標(biāo)本所含液體成份比固體成份多，標(biāo)本制備可參考液體大便制備方法（見(jiàn)“標(biāo) 本：液體大便） 標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)控： 標(biāo)準(zhǔn)和對(duì)照品： 標(biāo)準(zhǔn)品（S1）,陽(yáng)性對(duì)照品（C1、C3）和陰性對(duì)照品(C2)必須與病人標(biāo)本用相同的制備方法 處理。 1， 使用漩渦震蕩器混勻。 2， 使用帶有一次性吸頭的移液器收集 200ul 標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌菲分翝崈綦x心管中。 3， 使用帶有一次性吸頭的移液器，吸取 1000ul 標(biāo)本稀釋液（R1），加入離心管。 4， 使用漩渦震蕩器混勻。 5， 使用帶有一次性吸頭的移液器，吸取 300uµL 上清用于 VIDAS 難辨梭菌毒素 AB 檢測(cè)。 已制備標(biāo)本的保存： 如不能立刻進(jìn)行難辨梭菌毒素 AB 檢測(cè)，已制備的標(biāo)本上清、標(biāo)準(zhǔn)和對(duì)照品可在 2～8℃保 存不超過(guò) 48 小時(shí)。 超過(guò) 48 小時(shí)的上清、標(biāo)準(zhǔn)和對(duì)照品必須丟棄。